Этап усвоения новых знаний по
теме:
Лабораторная работа "
Влияние различных условий на активность ферментов
"
Цель: выяснить влияние температуры
на фермент амилазы слюны.
Оборудование: 2 пробирки, спиртовка, фермент
амилаза в составе слюны.
1. Влияние
температуры на активность
ферментов
Ферменты очень
чувствительны к температуре и при нагревании до 60-80°С они теряют
активность.
В термолабильности
ферментов можно убедиться на примере действия фермента слюны -
амилазы, которая при кипячении теряет свои ферментативные
свойства. Порядок выполнения
работы
В две пробирки
вносят по 1 мл разведенной слюны. Содержимое одной из пробирок
кипятят на спиртовке в течение 1-2 мин и затем охлаждают в стакане
с водой. В обе пробирки добавляют по 10 капель 1%-го раствора
крахмала, встрякивают и оставляют на 10 мин при комнатной
температуре. После этого пробелы-дают качественную реакцию на
крахмал, добавляя в каждую пробирку по 2 капли настойки йода. Йод с
крахмалом дает синее окрашивание. Полученные результаты заносят в
таблицу 1.
№
пробирки
|
Субстрат
|
Фермент
|
Реакция
с йодом
|
1
2
3
4
|
Крахмал
Крахмал Сахароза
Сахароза
|
Амилаза
Сахараза Амилаза
Сахараза
|
|
2. Влияние среды на активность
фермента амилазы
Скорость
ферментативных реакций в очень большой степени зависит от
концентрации в среде водородных ионов. Концентрация H ионов, при
которой наблюдается максимальная скорость реакции, называется
оптимальной. Изменение кислотности среды в ту или другую сторону от
оптимума рН вызывает понижение активности фермента.Влияние значения
рН на активность фермента связано в первую очередь с ионизацией
функциональных групп фермента, входящих в состав активного центра
фермента. Оптимум рН действия амилазы слюны определяют при
взаимодействии ее с крахмалом при различных значениях рН среды.О
степени расщепления крахмала судят по окраске продуктов реакции с
раствором йода. При оптимальном значении рН расщепление крахмала
произойдет полностью (отсутствие окраски с йодом); по мере удаления
от
этой точки в кислую
или щелочную зону расщепление крахмала произойдет только частично,
до стадии декстринов (красно-бурая или фиолетовая окраска), или
крахмал вообще не будет расщепляться (синяя окраска с
йодом).
Цель
работы:
- выявить влияние
реакции среды на активность фермента
амилазы
Оборудование: раствор амилазы
(слюна),раствор крахмала 1%-ый, раствор йода (раствор люголя),
фосфатная буферная смесь (рH от 5,4 до 8,0). В восемь
пронумерованных пробирок приливают по 2 мл фосфатной буферной смеси
с различным значением рН - от 5,4 до 8,0. Жидкость в каждой
пробирке пере-мешивают и в каждую добавляют по 1 мл 1%-го раствора
крахмала и по 0,5 мл раствора слюны. Пробирки оставляют стоять на
столе на 10 мин. После этого из каждой пробирки 1 каплю смешивают с
1 каплей йода на предметном стекле и сравнивают между собой окраски
из каждой пробирки. Когда содержимое пятой пробирки будет давать с
йодом красно-бурую окраску, через 1-2 мин во все пробирки добавляют
по 2-3 капли раствора йода, начиная с первой, и содержимое хорошо
взбалтывают. Сравни-
вают между собой
окраску всех пробирок и по полученной окраске судят о степени
расщепления крахмала, а следовательно, об активности фермента в
зависимости от значения рН среды. Результаты опыта и выводы
записывают в таблицу 2.
Влияние реакции
среды на активность фермента
амилазы
Значение рН
пробы
|
5,4
|
5,8
|
6,2
|
6,6
|
6,8
|
7,0
|
7,4
|
8,0
|
Окраска с
йодом
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|